Труден и хидрофобен пептиден синтез

Труден пептиден синтез|Персонализиране на хидрофобен пептид|Труден пептиден синтез|Синтез на клъстерна последователност|Научен-пептид

Пептидната последователност е твърде хидрофобна? Агрегиране лесно? Множество двойки дисулфидни връзки? Услугите на Science-Peptide's Difficult Peptide Synthesis и Hydrophobic Peptide Synthesis са специализирани във всички видове „не мога да го направя“. 20 години опит, специални системи за разтворители, стабилна доставка. Моля, не се колебайте да се свържете с нас.

Какъв вид пептиди се считат за "трудни"?
Тъй като съм бил в бизнеса със синтез на пептиди от 20 години, виждал съм всякакви трудни пептиди. Когато идват клиенти при нас, те вече са питали няколко фирми и отговорът, който получават е или „Не мога“ или „Опитайте, няма гаранция“.

Пептид със силна хидрофобност: трансмембранна област, сигнален пептид, хидрофобна аминокиселина, когато се синтезира, тя ще бъде слепена заедно върху смолата и аминокиселината зад нея няма да може да влезе.
Пептиди, които лесно се агрегират, като амилоид и антимикробни пептиди, се натрупват, когато се синтезират и запушват колоната, когато се пречистят.
Пептиди с множество двойки дисулфидни връзки: повече от три двойки, една грешна стъпка в реда на сдвояване и цялата молекула е разрушена.
Дълъг пептид: повече от 60 аминокиселини, всяка стъпка от добива намалява и накрая не остава нищо.
Сложна комбинация от модификации: фосфорилиране, флуоресценция, циклизация и условия, които се борят помежду си.
Можем да ги вземем всички и това не е „опитайте“, а „имайте план“.

1. Хидрофобни пептиди: със специализирани системи от разтворители
Трудността на хидрофобните пептиди се крие във факта, че те не могат да бъдат разтворени в конвенционални разтворители и когато се синтезират, пептидната верига се "слепва" върху смолата, което прави невъзможно влизането на аминокиселините зад нея.

Нашето решение:
Специална комбинация от разтворители: DMF, NMP, DCM смесена система, плюс малко течен освобождаващ агент, така че пептидната верига да се поддържа разтегната.
Оптимизиране на температурата: някои реакции са по-добри при 40 градуса от стайна температура, някои трябва да бъдат понижени до 0 градуса, ние ги изпробвахме една по една.
Избор на смола: Използвайте смола с висока разтворимост за хидрофобни пептиди, за да оставите достатъчно място за пептидни вериги.
Разтворими етикети: Ако не можете, добавете хидрофилен етикет и го отрежете след синтеза.

Реален случай: 35aa трансмембранен пептид, хидрофобни аминокиселини представляват 70%, клиентът търси три компании, не може да се направи. Променихме системата от разтворители и добавихме етикет за разтваряне, накрая чистотата беше 92% и клиентът направи изследването на структурата гладко.

2. Множество двойки дисулфидни връзки: без късмет, стратегия
Колкото повече дисулфидни връзки има, толкова по-трудно е да ги сдвоите. Два чифта са добре, но три или повече чифта и една грешна стъпка и всичко свършва.
Нашата стратегия:
Ортогонална защита: Cys може да се отвори и сдвои на стъпки, като се използват различни защитни групи, като Trt, Acm, tBu.
Оптимизиране на условията на окисление: окисление с въздух, окисление с глутатион, окисление с йод, различни методи за различни пептиди.
Междинен QC: След всяка двойка вземете проба за MS и потвърдете сдвояването, преди да продължите.
MS/MS потвърждение (по избор): окончателно прекъсване-с вторична масова спектрометрия, за да видите къде действително са свързани дисулфидните връзки.

A real case: A conotoxin peptide containing four pairs of disulfide bonds was rejected by many companies. We designed a four-step oxidation strategy, which took six weeks, and delivered >90% чистота, правилно сдвоени дисулфидни връзки и кристалната структура впоследствие е решена от клиента.

3. Склонни към агрегация-пептиди: синтезират се, докато се защитават
Някои пептиди естествено обичат да се агрегират, като амилоиден протеин и антибактериален пептид. Те започват да се агрегират, когато се синтезират, блокират колоната, когато се пречистят, и не могат да бъдат разтворени, когато са в ръка.
Нашето решение:
Псевдопролин: Псевдопролинът се въвежда в Ser/Thr позиция, за да наруши тенденцията на агрегиране и да се върне обратно след синтеза.
Сегментален синтез: Пептидите, които са твърде полимеризирани, се нарязват на няколко сегмента и се синтезират отделно, след което се свързват отново в края.
Оптимизиране на условията за пречистване: висока температура, киселинно рН, добавяне на органични разтворители, за да се намерят условия, които го правят не-полимеризиращ.

4. Комплексни комбинации от модификатори: условия без битки
Някои пептиди имат множество изисквания: фосфорилиране, флуоресцентно маркиране и циклизация. Тези модификации могат да са в конфликт помежду си - например, фосфорилирането е киселинно-фобно, флуоресцентното маркиране е светло-фобно, а циклизирането изисква специфично pH.
Нашият подход:
Проектиране на стратегия за опазване: кое подрязване да се направи първо, кое подрязване да се направи по-късно, проектирано предварително.
Ортогонални условия: Условията на всеки етап от реакцията не засягат вече направените модификации.
Междинен QC: След всяка стъпка на модификация вземете проба, за да се уверите, че е направена правилно, преди да продължите.

5. Чистота: В зависимост от това какво правите с него

Всеки пептид е придружен от HPLC и MS отчет, което прави данните за чистотата прозрачни.

1. Правим това от 20 години
Трудният пептиден синтез не е нещо, което всеки може да направи. През годините сме работили с много трудни пептиди: трансмембранни протеини, вирусни слети пептиди, конотоксини, амилоидни протеини, антимикробни пептиди и т.н. Имаме добра представа кои последователности са склонни към проблеми и кои условия могат да ги спасят. Поне не е нужно да опитвате всеки един от тях, ако дойдете при нас за труден и хидрофобен пептиден синтез.

2. Не е "опитайте", а "имайте програма".
Много компании се захващат с трудни пептиди и казват: „Ще го опитаме, но не го гарантираме“. Ние не играем по този начин. Преди да приемем поръчка, ние ще оценим последователността, какво е съотношението на хидрофобните аминокиселини, дали има известна тенденция на агрегиране, колко двойки дисулфидни връзки и дали модификацията е сложна или не. След оценка ще ви кажем: каква е степента на успех и колко е продължителността на цикъла.

Ние не приемаме поръчки, които не могат да бъдат изпълнени, и трябва да предадем поръчки, които сме поели.

3. Специализирани разтворителни системи за хидрофобност
Хидрофобният пептид е нашата силна страна. Ако конвенционалният разтворител не може да бъде разтворен, ние ще сменим разтворителя; ако конвенционалната температура не реагира, ние ще коригираме температурата; ако конвенционалната смола не издържи, ние ще сменим смолата. Съществува и етикетът за разтваряне като обратен изход.

4. Множество двойки дисулфидни връзки, стъпка-по-стъпка
Ако има повече от три двойки дисулфидни връзки, ще предприемем подход-по-стъпка: първата стъпка е да защитим А и да отворим първата двойка; защити B и отвори втората двойка; защитите C и отворете третата двойка. След всяка стъпка вземаме проби за MS и потвърждаваме сдвояването, преди да продължим. Накрая MS/MS ще бъде разбит и проверен и данните ще ви бъдат дадени без да предполагате.

5. Контрол на качеството: данни на всяка стъпка
Контролът на качеството на трудните пептиди трябва да бъде по-внимателен:
Междинен QC: След всеки фрагмент и всяка стъпка на модификация първо измерете чистотата и молекулното тегло.
Краен продукт: HPLC за чистота, MS за молекулно тегло.
Тест за разтворимост: Осигурете препоръчани разтворители и методи за разтваряне, така че да не получите пептиди, които не се разтварят.
Извършвайки труден и хидрофобен пептиден синтез, данните говорят сами за себе си, всяка стъпка може да бъде проследена.

• Форма на доставка: лиофилизиран прах, центрофужни епруветки или флакони.
• Придружаващи документи: COA (HPLC профил + MS спектър), доклад за синтез (по избор).
• Тестове по избор: съдържание на пептиди, ендотоксин, влага, аминокиселинен състав, тест за разтворимост.
• Персонализирано опаковане: порциониране и маркиране според вашите изисквания.
• Всеки труден и хидрофобен пептиден синтез продукт се преглежда, за да се гарантира, че последователността е правилна и чистотата отговаря на стандарта, преди да бъде изпратен.

Независимо дали сте били отхвърлени от други или не можете да го направите в собствената си лаборатория, можете да говорите с нас. Ако търсите научен-пептид за извършване на труден и хидрофобен пептиден синтез, поне не е нужно да опитвате един по един.

Трябва да ми кажеш:
Пептидна последователност (или целева информация)
Накарал ли сте някой друг да го прави преди? какъв е резултатът
Колко (милиграми)
изисквания за чистота

кога го искаш

Да ви даде оценка за осъществимост и оферта за програмата в рамките на 24 часа.